Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera ad 5

Nie zaobserwowaliśmy klinicznie znamiennej poprawy ostrości wzroku u żadnego z trzech pacjentów (Tabela 1) ani żadnej zmiany w obwodowych polach widzenia w badaniu perymetrycznym Goldmanna. Nie wykryliśmy żadnych zmian w odpowiedziach siatkówki na flash lub wzór elektroretinografii. Przed zabiegiem pacjent 2 miał oczopląs o wysokiej amplitudzie, który nie zmieniał się po leczeniu. Ryc. 2. Czytaj dalej Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera ad 5

Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera czesc 4

Panel B przedstawia przekrojowe obrazy siatkówki uzyskane za pomocą optycznej tomografii koherencyjnej z wykorzystaniem sześciu 6-milimetrowych skanów linii promieniowej i standaryzowanego protokołu mapowania w celu pokazania struktury warstw siatkówki u każdego pacjenta. Obecność resztkowego wektora podsiatkówkowego dzień po zabiegu pokazano (strzałki) w Pacjentach i 3 przez obszar niskiego sygnału (czarny). Obrazy w Pacjent 2 były niezauważalne dzień po operacji z powodu oczopląsu o wysokiej amplitudzie. Wykonaliśmy witrektomię i wstrzyknięcie podskórne wektora bez komplikacji u każdego pacjenta (ryc. i wideo). Czytaj dalej Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera czesc 4

Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera cd

Punkt końcowy dla skuteczności u każdego pacjenta określono jako poprawę funkcji wzrokowej, która była większa niż różnica między testem a testem powtórnym dla każdej techniki. Test odpowiedzi immunologicznej i wykrywanie rozsianego zrekombinowanego wirusa związanego z adenowirusami opisano w Dodatku Dodatkowym. Rekombinowany wirus związany z adenowcem i dostarczanie podsiatkówkowe
Wektor tgAAG76 jest rekombinowanym wektorem wirusowym adenowirusowym o serotypie 2. Wektor zawiera ludzką sekwencję kodującą RPE65 kierowaną przez fragment 1400-bp ludzkiego promotora RPE65 i zakończoną przez bydlęce miejsce poliadenylacji hormonu wzrostu, jak opisano w innym miejscu. Wektor został wyprodukowany przez Targeted Genetics Corporation zgodnie z wytycznymi Good Manufacturing Practice z użyciem linii komórek pakujących B50, 23 hybrydowego wektora wahadłowego adenowirusa-adenowirusa zawierającego genom wektora tgAAG76 i wirusa pomocniczego adenowirusa 5. Czytaj dalej Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera cd

Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera ad

W tym eksploracyjnym, otwartym, jednoośrodkowym badaniu z udziałem trzech młodych osób dorosłych, z których każdy otrzymał pojedyncze podskórne wstrzyknięcie rekombinowanego wirusa związanego z adenowirusem 2/2. HRPE65p.hRPE65, pierwotnym rezultatem było bezpieczeństwo, a drugorzędowy wynik był dowód skuteczności pod względem funkcji wzrokowej. Metody
Pacjenci i projekt studiów
W badaniu tym uwzględniliśmy młodych dorosłych (17 do 23 lat) z wczesnym początkiem, ciężką dystrofią siatkówki spowodowaną przez mutacje missense w RPE65 (Tabela Dodatkowego Dodatku, dostępna z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm .org). Wykluczono osoby z ostrością wzroku w badanym oku, które były lepsze niż 20/120 w skali ostrości wzroku Snellena, mutacje zerowe i przeciwwskazania do układowej immunosupresji, a także kobiety w ciąży lub karmiące piersią. Laboratorium diagnostyczne National Health Service (Manchester Regional Genetics Laboratory) potwierdziło genotypy potencjalnych pacjentów. Czytaj dalej Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera ad

Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera

Wczesny początek, ciężka dystrofia siatkówki spowodowana mutacjami w genie kodującym specyficzne dla nabłonka barwnikowego białko 65-kD (RPE65) wiąże się ze słabym wzrokiem przy urodzeniu i całkowitą utratą wzroku we wczesnej dorosłości. Podajemy trzem młodym dorosłym pacjentom podskórne iniekcje rekombinowanego wirusa adenowirusowego 2/2 eksprymującego RPE65 komplementarny DNA (cDNA) pod kontrolą ludzkiego promotora RPE65. Nie było poważnych zdarzeń niepożądanych. Nie stwierdzono klinicznie istotnych zmian ostrości wzroku lub obwodowych pól widzenia na obwodzie Goldmanna u żadnego z trzech pacjentów. Nie wykryliśmy żadnych zmian w odpowiedziach siatkówki na elektroretinografię. Czytaj dalej Wpływ terapii genowej na funkcję wzrokową w wrodzonej amaurozie Lebera

Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera ad 6

Dla prawego (wstrzykniętego) oka Pacjenta 3, zmiana wyniku logMAR wynosiła 0,34, więcej niż 3,5 linii liter (P = 0,002 według testu sumy rang Wilcoxona). Obserwowaliśmy tendencję do poprawy pola widzenia każdego z trzech podmiotów (Tabela i Rysunek 3 Dodatku Aneks). Chociaż badanie pola widzenia w grupach pacjentów z ciężkim zaburzeniem widzenia wykazuje znaczną zmienność, 18,19 obserwowane powiększenia przekraczały zmienność oka, która nie otrzymała iniekcji.
Wszyscy trzej pacjenci mieli istotny oczopląs w punkcie wyjściowym (patrz rozdział Wyniki w dodatkowym dodatku). Po wstrzyknięciu AAV2.hRPE65v2, u pacjentów obserwowano zmniejszenie zarówno amplitudy jednoocznej, jak i obuocznej oraz częstości oczopląsu w pozycji pierwotnej, z mimośrodowym spojrzeniem oraz z pokrywą jednooczną. Czytaj dalej Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera ad 6

Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera ad 5

W kolejnej próbie, gdy ten sam niewykorzystany bodziec był początkowo prezentowany lewemu oku, odruchy źreniczne światła obu źrenic były minimalne, ale gdy bodziec został przedstawiony prawemu oku, ponownie zarejestrowano silną reakcję (Figura 2H), wzór powtarzany z kolejnymi miganiami naprzemiennymi. Rezultatem netto było pojawienie się względnej afektycznej wady źrenicowej, w której wstrzyknięte oko wywołuje odruch źreniczny źrenicy, podczas gdy nieodgadnione oko pozostaje wadliwe. Pacjenci i 2 wykazali poprawę w odpowiedzi prawego oka (wstrzykniętego) na bodziec 10,0 luksów (Figura 2C i 2E) w stosunku do lewego oka (bez iniekcji) (Figura 2D i 2F, pokazana na 4,75 miesiąca i 2,75 miesiące po wstrzyknięciu, odpowiednio). Co więcej, dla obu Pacjentów i 2 istniała wyraźna różnica w odpowiedzi na drugi bodziec w badaniu, tak że stymulacja prawego oka dawała silniejszą odpowiedź, nawet jeśli lewe oko było stymulowane jako pierwsze (Figura 2D i 2F). Przeprowadzono statystyczne porównania pomiędzy odpowiedzią każdego ucznia po początkowej stymulacji prawego (wstrzykniętego) oka i odpowiedzią tego samego ucznia po początkowej stymulacji lewego (niewinnego) oka. Czytaj dalej Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera ad 5

Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera czesc 4

Reprezentatywne wyniki Pupillometrii u osobnika kontrolnego oraz przed i po iniekcji podsiatkówkowej w prawym oku trzech pacjentów. Panele A i B pokazują odruchy światła źrenicy u osobnika kontrolnego po adaptacji ciemności i naprzemiennie stymulację z 0,04 luksów, zaczynając najpierw w prawym oku (czerwone kolumny), a następnie w lewym oku (niebieskie kolumny), odpowiednio. Czerwone krzywe reprezentują średnicę prawej źrenicy, a niebieskie krzywe przedstawiają średnicę lewej źrenicy. Odruchy światła źrenicy przedstawiono po naprzemiennej stymulacji 10,0 luksów, zaczynając od prawej, a następnie w lewym oku, odpowiednio, dla Pacjenta na początku badania i 4,75 miesiąca po wstrzyknięciu (panele C i D), a dla pacjenta 2 na linię podstawową i 2,75 miesiące po wstrzyknięciu (panele E i F). Odruchy światła źrenicy dla Pacjenta 3 w punkcie wyjściowym i miesiąc po wstrzyknięciu pokazano po naprzemiennej stymulacji 0,04 luksów (panele G i H) i 10,0 luksów (panele I i J), najpierw w prawym oku, a następnie w lewym oku , odpowiednio. Czytaj dalej Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera czesc 4

Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera cd

Obiektywne pomiary obejmowały ocenę źrenicowego odruchu świetlnego i badania oczopląsu. Subiektywne pomiary obejmowały standardowe testy ostrości wzroku, badanie pola wzrokowego Goldmanna i testowanie mobilności w celu oceny różnic w zdolnościach pacjentów do poruszania się po znormalizowanym torze przeszkód (Tabela i Rysunek 3 oraz sekcja Metody dodatku uzupełniającego i wideo). Ostrość wzroku została zmierzona przez przeszkolonych lekarzy wzroku przy użyciu standardowego protokołu obejmującego wykresy Retinopathy Studium Wczesnego Leczenia (ETDRS) i liczby liter. Wyniki liter zostały przekształcone w log minimalnego kąta rozdzielczości (logMAR), w skali od 0,00 do 2,00, z wyższymi wartościami wskazującymi gorsze widzenie. Oczom, które mogły wykryć ruchy rąk, przypisano wynik gorszy o jedną linię niż największa drukowana linia na wykresie testowanym w standardowej odległości 4 m (<20/1600), aby zapewnić najbardziej zachowawczą ocenę pod względem niedoszacowania rzeczywistego zakresu zaburzeń widzenia.17
Wyniki
Charakterystyka pacjentów
Trzej kolejni pacjenci, którzy mieli LCA2 i byli w wieku od 19 do 26 lat, wyrazili pisemną świadomą zgodę (patrz Dodatek dodatkowy). Czytaj dalej Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera cd

Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera ad

1. Wygląd siatkówki i cechy morfologiczne przed i po zabiegu operacyjnym u trzech pacjentów. W panelu A zdjęcia 30 stopni dna oka wykonane aparatem Topcon przedstawiają tarczę i plamę prawego i lewego oka pacjentom 1, 2 i 3 przed operacją. W prawym oku pacjenta 2 widoczne są błonę preretinalną i rozstępy siatkówki (strzałka), a u Pacjenta 3 widoczne są zmiany pigmentowe w obrębie dołka. W panelu B nadal fotografie z materiału wideo wykonanego za pomocą mikroskopu operacyjnego pokazują prawe oko każdego pacjenta podczas wstrzykiwania podskórnego AAV2.hRPE65v2. Czytaj dalej Bezpieczeństwo i skuteczność przenoszenia genów na wrodzoną amaurozę Lebera ad